Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型高血压患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到家兔自身免疫球蛋白到用到1型式冠心病外科腹泻的成果率在婴幼儿时代就有却是佳的叙述，多个家兔自身免疫球蛋白HIV的婴幼儿中所有70%在肝细胞转换后10年内中所风冠心病，而随访15年的婴幼儿这一%减低到84%。相比之下之下，占外科1型式冠心病一半以上的型式1型式冠心病的发作机制还没有给与更好的研究工作。

越来越多的人开始可用分期种系统来定义1型式冠心病的成果：形态在用到多种家兔自身免疫球蛋白时带入第1收尾，用到血糖异常时带入第2收尾，用到腹泻时带入第3收尾。一些多发家兔自身免疫球蛋白HIV的形态，在1期和2期，成果较更慢，并其发展为发作的1型式冠心病。我们之前叙述了一两组在首次测定到多种家兔自身免疫球蛋白采样后至不及10年无冠心病的却是更慢成果者，这两组病变人数不及，但特征非常一致。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T细胞核质子化在成果缓更慢的病变中所大体不存在，但在近期发作和与此相关的冠心病病变中所很较难测定到。这也许表明，与成果病变相比之下，这些病变自身免疫质子化的适度提升。

早期研究工作表明，尽管适度性T细胞核(Treg)量正常，但冠心病病变存在一些特性缺陷，其中所包括对IL-2的质子化能力降低。此外，冠心病病变中所的振荡CD4+T细胞核也许对适度增添抵抗性，表现为振荡T细胞核的消除减慢，大自然造成的Treg和纤外造成的消除Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核中所IL-2质子化减慢。本研究工作的目的是叙述了CD4+适度性T细胞核(Treg)在一小群却是缓更慢成果者中所的特征，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究工作是一项以许多人依此的横向研究工作，在21岁一般而言确诊的病变亲戚中所检查1型式冠心病的脆弱因素。我们之前叙述了长期缓更慢成果者的特征，他们始终保持多重家兔自身免疫球蛋白HIV少于10年，但没有用到冠心病的外科腹泻，更慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续始终保持无冠心病并主动提供大量尿液采样的缓更慢成果者划入T和B细胞核特性深入研究。在目前的研究工作中所，8名更慢成果者(SP两组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中所间的家兔自身免疫球蛋白HIV。所有的行动者都所处1型式冠心病成果的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫球蛋白对某些抗原的HIV质子化，然而，一名病变从未所处2期至不及6年，但没有用到外科腹泻，一名病变被诊断为冠心病，该受试者72岁，在挖掘出实验采样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中所对该NAD开展了另行评核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，引入多变量流式细胞核术和T细胞核消除试验评核NAD中所Treg的基频、环境因素式和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和重归)开展无委派聚类深入研究，评核Treg环境因素式。

结果：与心理健康NAD相比之下，来自更慢成果纤的心灵CD4+T细胞核的委派聚类结果显示，激活的心灵CD4+ Treg基频减低，与糖皮质激素消除的TNFR关的细胞(GITR)解读减低有关。一名HbA1c增高的病变与成果缓更慢者和冗余的IgG相比之下，Treg谱有所相异。特性深入研究表明，与心理健康NAD相比之下，来自缓更慢成果纤的Treg酪氨酸的CD4+振荡T细胞核消除明显受损。表现为对振荡CD4+T细胞核CD25和CD134解读的消除减低。

由此可知1 险恶的环境因素式深入研究结果显示，CD4+Treg亚型式在更慢成果函数调用中所减低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物解读断定出10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;文件种系统Treg_1;文件种系统Treg_2;文件种系统Treg_3;和文件种系统Treg_4。(a)可用9个相异Treg标上生成的10个元簇的MST。每个数据流都是一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在数据流两组四周上色。每个数据流中所的饼由此可知说明单个标上的解读等级。(b)每个元聚类的热由此可知，以结果显示全面性标上解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成由此可知，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于核素为每个metacluster箱支由此可知表(核素> 0.05%)确定为HD和SP两组:文件种系统Treg_2 (e),文件种系统Treg_3 (f),文件种系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。粉红色圆圈都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩验证。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 可用CITRUS的系统结构式证实，Treg基频的减低是成果缓更慢的红色。评定去却是化(a - f)和柑橘深入研究(g-k)较为SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的红色性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读开展分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(小点)和SP(星点)两组以及NADSP 606(粉红色)中所CD25+ cd127的基频汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去却是化集合的箱支由此可知表;(c) HLA-DRloGITR−(文件种系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件种系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件种系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件种系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读低压着色，记号突出的簇被比对为SP和HD函数调用中所间的相异。(j)箱支由此可知表结果显示了在SP(星点)和HD(灰点)两组中所，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于核素(%)。(k)直方由此可知结果显示每个簇的环境因素式(粉红色)和Treg标上相对于解读与故事情节解读(金色);上列，文件种系统Treg_3;上面偷偷地，文件种系统Treg_4。故事情节与所有其他簇中所标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩验证

由此可知3 与心理健康献血者相比之下，成果缓更慢者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;文件种系统Treg_2;文件种系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标上的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读串联，结果显示直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon类推符号秩和验证，p< 0.07(粉红色)所有NAD包括，p< 0.05(金色)NADSP 606和冗余的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从评定去却是化，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(粉红色)串联，结果显示直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩验证

由此可知4 来自缓更慢成果的CD4+ treg细胞核掌控振荡CD4+T细胞核的能力降低。SP两组用金色的支线和圆圈说明，HD两组用金色的支线和圆圈说明，粉红色的支线/圆圈说明NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按判读的%氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠消除细胞核，指导3当晚开展流式细胞核术测定。(a-d)与CD4+转发者相对于其所的treg指导(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。可用HIV对照(激活的响其所细胞核不含treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

由此可知5 振荡CD4+T细胞核对缓更慢成果的T细胞核消除的消除更敏感。SP两组用金色的支线和圆圈说明，HD两组用金色的支线和圆圈说明，粉红色的支线/圆圈说明NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按判读的%氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠消除细胞核，指导3当晚开展流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

正确性：我们得出的正确性是，来自缓更慢成果子的消除心灵CD4+Treg在GITR解读中所给与了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1型式冠心病风险形态中所的异质性的实质。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28