Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐构建

从第一次显现出来胰脏自身上皮细胞到显现出来1改进型心血管疾病临床症状的重大突破率在儿童以前就有很好的描绘，多个胰脏自身上皮细胞非典型的儿童；还有70%在抗体转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一比例减小到84%。远比之下，占临床1改进型心血管疾病一半以上的改进型1改进型心血管疾病的得病机制还不会受益充分的研究成果。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1改进型心血管疾病的重大突破：生物体在显现出来多种胰脏自身上皮细胞时转到第1先决条件，显现出来血糖异常时转到第2先决条件，显现出来症状时转到第3先决条件。一些多发胰脏自身上皮细胞非典型的生物体，在1期和2期，重大突破更快，并发展为得病的1改进型心血管疾病。我们之前描绘了一组成员在首次检测到多种胰脏自身上皮细胞样本后数10年无心血管疾病的极慢速重大突破者，这组成员患儿人数少，但特征比较明确。随后，我们发现胰脏自身上皮细胞特异性CD8+T细胞核反应在重大突破减慢速的患儿之中原则上不共存，但在近期得病和长期共存的心血管疾病患儿之中很容易检测到。这或许表明，与重大突破患儿远比，这些患儿自身病原体的调节增强。

晚期研究成果表明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但心血管疾病患儿共存一些特性缺陷，其之中之外对IL-2的反应并能减少。此外，心血管疾病患儿之中的物理现象CD4+T细胞核或许对调节突显抵抗性，展示出为物理现象T细胞核的诱导弱化，自然转化成的Treg和游离转化成的作用于Treg，以及上皮细胞个人经历的CD4+T细胞核之中IL-2反应弱化。本研究成果的目标是描绘了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群极减慢速重大突破者之中的特征，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以成年人为基础的主干研究成果，在21岁以下胃癌的患儿亲属之中检查1改进型心血管疾病的危险因素。我们之前描绘了长期减慢速重大突破者的特征，他们保持稳定多重胰脏自身上皮细胞非典型有约10年，但不会显现出来心血管疾病的临床症状，慢速性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无心血管疾病并愿意提供大量血液样本的减慢速重大突破者纳入T和B细胞核特性分析。在迄今为止的研究成果之中，8名慢速重大突破者(SP组成员)，之中位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的胰脏自身上皮细胞非典型。所有的旁观者都西北面1改进型心血管疾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身上皮细胞对某些上皮细胞的黄疸，然而，一名患儿早就西北面2期数6年，但不会显现出来临床症状，一名患儿被诊断为心血管疾病，该人会72岁，在搜集科学实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该NADP展开了单独风险评估。分开外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核法术和T细胞核诱导试验风险评估NADP之中Treg的增益、表改进型和特性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)展开无监督聚类分析，风险评估Treg表改进型。

结果：与保健NADP远比，来自慢速重大突破体的失忆CD4+T细胞核的监督聚类辨识，激活的失忆CD4+ Treg增益减小，与糖皮质激素作用于的TNFR相关细胞(GITR)强调减小有关。一名HbA1c增高的患儿与重大突破减慢速者和匹配的比较少远比，Treg谱大同小异。特性分析表明，与保健NADP远比，来自减慢速重大突破体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞核诱导明显受到破坏。展示出为对物理现象CD4+T细胞核CD25和CD134强调的诱导减小。

绘出1 深入的表改进型分析辨识，CD4+Treg亚改进型在慢速重大突破队列之中减小。由FlowSOM转换成的Treg室，组织起来在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物强调鉴别出10个元簇:失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个不同Treg上标转换成的10个元簇的MST。每个路由器代表者一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在路由器组成员附近制做。每个路由器之中的甜品绘出指出单个上标的强调级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整体上标强调。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转换成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster装该线绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞核(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞核(l)。深蓝色橘色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 采用CITRUS的预测模改进型证实，Treg增益的减小是重大突破减慢速的徽标。分级门控(a - f)和橄榄分析(g-k)相较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l成年人的代表者性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR强调展开分开，模拟FlowSOM成年人。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及NADPSP 606(深蓝色)之中CD25+ cd127的增益汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的装该线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，圆圈出彩的簇被识别为SP和HD队列两者之间的不同。(j)装该线绘出辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相较丰度(比例)。(k)直方绘出辨识每个簇的表改进型(暗红色)和Treg上标相较强调与背景强调(黄色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇之中上标的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

绘出3 与保健献血者远比，重大突破减慢速者失忆treg的GITR减小。每个失忆CD4+T细胞核元簇(失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调上标的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热绘出(sp606不之外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇之中所有HD(黄色)、所有SP(黄色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR强调串联，辨识直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NADP之外，p< 0.05(黄色)NADPSP 606和匹配的HD不之外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR强调，从分级门控，从所有HD(黄色)、所有SP(黄色)和SP 606(深蓝色)串联，辨识直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

绘出4 来自减慢速重大突破的CD4+ treg细胞核高度集之中物理现象CD4+T细胞核的并能减少。SP组成员用黄色的该线和橘色指出，HD组成员用紫色的该线和橘色指出，深蓝色的该线/橘色指出NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(应答者)被上标为CFSE, Treg按观察的比例试样。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，培养出来3天后展开流式细胞核法术检测。(a-d)与CD4+应答者相较应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导倍数。采用非典型对照(激活的响应细胞核不含treg)计算诱导倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相较测试

绘出5 物理现象CD4+T细胞核对减慢速重大突破的T细胞核诱导的诱导更敏感。SP组成员用黄色的该线和橘色指出，HD组成员用紫色的该线和橘色指出，深蓝色的该线/橘色指出NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上标，treg按观察的比例试样。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，培养出来3天后展开流式细胞核法术(CD25反染)和细胞核因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导百分率(b)。(c,d) CD25诱导百分率(c)和CD134诱导百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来之中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相较测试

论证：我们推断的论证是，来自减慢速重大突破三子的诱导失忆CD4+Treg在GITR强调之中受益了扩张和比较丰富，强调了进一步研究成果Treg在1改进型心血管疾病效用生物体之中的值得注意的必要性。

之中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28